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          牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒

          牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒

          產品型號: QS3888

          所屬分類:牛ELISA試劑盒

          產品時間:2020-04-01

          簡要描述:牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒蘇州千舍生物科技有限公司提供,1-2個工作日發貨,提供免費代測服務,收到標本起一周內提供原始數據和之后數據,提供ELISA各種樣本收集、處理、保存方法,歡迎您致電咨詢 ELISA試劑盒存狀態,售后說明等

          詳細說明:

          牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒蘇州千舍生物為您傾情供應,成熟技術,嚴格工藝流程,*抗體/抗原,嚴格QC檢測后方可出庫,請放心購買!

          牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒

           一.實驗目的
               酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應酶標記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產生成正比。

          操作注意事項
          1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
          2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。 
          3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
          4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
          5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
          6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
          7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
          8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
          9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

          牛一氧化氮NO ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
          1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
          2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
          5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          牛一氧化氮NO ELISA試劑盒的準備
          1)標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。
          2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          牛一氧化氮NO ELISA試劑盒操作步驟
          1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
          2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
          3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37溫育1小時。
          4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
          5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37溫育30分鐘。
          6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
          7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37溫育10分鐘。避免光照。
          8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
          9)在450nm波長處測定各孔的OD值。

          牛一氧化氮NO ELISA試劑盒結果判斷與分析
          1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

          基本方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 
            1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 
            2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 
            3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。 
            4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 
            5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。 
            6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O•D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O•D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

            



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